Human Aβ1-42(Amyloid Beta 1-42) ELISA Kit
中文名称：人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)酶联免疫吸附测定试剂盒
Price:
- 反应性： Human
- 检测范围： 15.63-1000 pg/mL
- 灵敏度： 9.38 pg/mL
| 产品应用 | ELISA |
| 检测原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人Aβ1-42抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的人Aβ1-42会与包被抗体结合。后依次加入生物素化的抗人Aβ1-42抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，抗人Aβ1-42抗体与结合在包被抗体上的人Aβ1-42结合，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450 nm波长处测OD值，Aβ1-42浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中Aβ1-42的浓度。 |
| 反应类型 | Sandwich-ELISA |
| 规格 |
96 T
/ 48 T
/ 96 T × 5
|
| 反应时间 | 3 h 30 min |
| 反应性 | Human |
| 检测方法 | 比色法;ELISA;夹心法 |
| 检测范围 | 15.63-1000 pg/mL |
| 灵敏度 | 9.38 pg/mL |
| 样本体积 | 100 μL |
| 样本类型 | 血清、血浆或其他生物体液 |
| 特异性 | 可检测样本中的人Aβ1-42，且与其它类似物无明显交叉反应 |
| 精密度 | 板内，板间变异系数均<10% |
| 回收率 | 80%-120% |
| 储存条件 | 2-8℃ |
| 有效期 | 12个月 |
| 数据处理 |
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Q1:(Aβ1-40) 和(Aβ1-42)有什么区别？这两个试剂盒检测的是可溶性蛋白还是不可溶性蛋白？
这两个指标检测总蛋白含量； 哺乳动物中，APP基因位于21号染色体，共有8个亚型，其亚型一般含有365~770个氨基酸残基。最常见的是APP695、APP751和APP770，其中APP695在中枢神经中高度表达。APP属I型跨膜糖蛋白，分子量约110~130 kDa，具有较大的膜外(氨基端)结构域和较小的胞质尾区(胞内羧基端)。APP主要通过淀粉样(β途径)和非淀粉样(α途径)2种途径进行代谢。淀粉样途径即APP被β分泌酶切割成为sAPPβ和1个含有99个氨基酸的C端片段；后者进一步被γ分泌酶切割成为Aβ和ACID，这种途径生成的Aβ占Aβ总量的90%~95%，包括Aβ1-40和Aβ1-42 2种类型，其中Aβ1-40的含量较高，但Aβ1-42具有强疏水作用，其毒性较大，而且易于聚合。这些Aβ碎片会在线粒体、溶酶体以及内质网中积累，从而导致这些亚细胞器功能失调。在基于α分泌酶的非淀粉质源途径中，α分泌酶将APP切割为sAPP和1个含有83个氨基酸的C端片段，然后被γ分泌酶切割产生P3和ACID，但这些小的片段会被神经元清除掉。 APP基因突变可引起蛋白表达异常或水解改变，从而影响Aβ在细胞中的含量和组成变化。Aβ在脑内主要以Aβ40和Aβ42 2种形式存在，其中Aβ42含量虽低(<10%)，但易于聚合，进而纤维化而沉积，从而形成弥散性老年斑(senile plaque)，这也是AD的主要病理特征之一。而且，APP在细胞膜上经β-和γ-分泌酶切割后产生的Aβ可以引起氧化应激、钙离子内流，进而损伤线粒体，导致神经细胞障碍，激活凋亡相关蛋白和因子，最终启动细胞的凋亡程序。另外，Aβ还可以通过引起脑内炎症反应和神经纤维缠结间接导致神经元凋亡，是AD形成和发展的重要原因。
Q2:(Aβ1-40) 和(Aβ1-42)有什么区别？
哺乳动物中，APP基因位于21号染色体，共有8个亚型，其亚型一般含有365~770个氨基酸残基。最常见的是APP695、APP751和APP770，其中APP695在中枢神经中高度表达。APP属I型跨膜糖蛋白，分子量约110~130 kDa，具有较大的膜外(氨基端)结构域和较小的胞质尾区(胞内羧基端)。APP主要通过淀粉样(β途径)和非淀粉样(α途径)2种途径进行代谢。淀粉样途径即APP被β分泌酶切割成为sAPPβ和1个含有99个氨基酸的C端片段；后者进一步被γ分泌酶切割成为Aβ和ACID，这种途径生成的Aβ占Aβ总量的90%~95%，包括Aβ1-40和Aβ1-42 2种类型，其中Aβ1-40的含量较高，但Aβ1-42具有强疏水作用，其毒性较大，而且易于聚合。这些Aβ碎片会在线粒体、溶酶体以及内质网中积累，从而导致这些亚细胞器功能失调。在基于α分泌酶的非淀粉质源途径中，α分泌酶将APP切割为sAPP和1个含有83个氨基酸的C端片段，然后被γ分泌酶切割产生P3和ACID，但这些小的片段会被神经元清除掉。
APP基因突变可引起蛋白表达异常或水解改变，从而影响Aβ在细胞中的含量和组成变化。Aβ在脑内主要以Aβ40和Aβ42 2种形式存在，其中Aβ42含量虽低(<10%)，但易于聚合，进而纤维化而沉积，从而形成弥散性老年斑(senile plaque)，这也是AD的主要病理特征之一。而且，APP在细胞膜上经β-和γ-分泌酶切割后产生的Aβ可以引起氧化应激、钙离子内流，进而损伤线粒体，导致神经细胞障碍，激活凋亡相关蛋白和因子，最终启动细胞的凋亡程序。另外，Aβ还可以通过引起脑内炎症反应和神经纤维缠结间接导致神经元凋亡，是AD形成和发展的重要原因。
Q3:请问血清样品稀释可以用DD水吗
不能的，需要使用试剂盒自带的标准品&样品稀释液。
Q4:细胞裂解液需要先BCA定量后再做ELISA吗
蛋白定量没有具体要求，选做
Q5:神经递质的试剂盒有吗？大鼠的 咱们有推荐的吗？
脑内神经递质分为四类，即生物原胺类、氨基酸类、肽类、其它类。 生物原胺类神经递质包括:多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、5-羟色胺(5-HT)也称(血清素)。 氨基酸类神经递质包括:γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸、谷氨酸、组胺、乙酰胆碱(Ach)。 肽类神经递质分为:内源性阿片肽、P物质、神经加压素、胆囊收缩素(CCK)、生长抑素、血管加压素和缩宫素、神经肽y。其它神经递质分为:核苷酸类、花生酸碱、阿南德酰胺、sigma受体(σ受体)。其它类:一氧化氮就被普遍认为是神经递质，它不以胞吐的方式释放，而是凭借其溶脂性穿过细胞膜，通过化学反应发挥作用并灭活。在突触可塑性变化、长时程增强效应中起到逆行信使的作用。
Q6:检测组织匀浆上清时，是否需要将组织匀浆上清稀释到相同的浓度(ug/ul)再上样？
不需要稀释成统一的组织蛋白浓度再上样，可以将组织样本制成10%组织匀浆上清，然后再用BCA法检测组织蛋白的总浓度，再进行ELISA检测。用ELISA方法检测到的靶蛋白浓度除以组织匀浆上清的总蛋白浓度，来表示组织匀浆上清中目的蛋白的浓度（pg/mg prot或者ng/mg prot）。
Q7:有可以测植物或者是微生物样本ELISA试剂盒吗？
目前我们的ELISA试剂盒仅适用于动物样本，没有用于检测植物/微生物样本的试剂盒
Q8:我需要测毛发里面的皮质酮和睾酮，有没有一些样本提取的步骤呢？
头发样本制备方法：
头发样本用甲醇清洗，在每个样品中加入5 mL高效液相色谱(HPLC)级甲醇，旋转3分钟，然后倒入多余的甲醇，将头发洗两次。洗发后，将头发样本放在铝箔上，在防护帽中干燥3天。称量干燥的头发样本，并转移到含有不锈钢研磨珠的2ml聚丙烯管中。将含有头发和磨珠的试管放入搅珠器中，每个样品研磨2分钟以产生粉末。研磨后，在装有头发粉的试管中加入1.5 mL甲醇，样品缓慢旋转孵育24小时以提取类固醇。10000 g离心4 min，将0.6 mL含类固醇的甲醇上清转移到新的1.5 mL微离心管中。样品在防护罩中干燥2-3天以蒸发甲醇。蒸干提取物用0.4 mL试剂盒中的稀释液稀释后检测
Q9:我的样本体积不过，可以少加一些，然后其他试剂等比例减少吗？
不可以，我们试剂盒的检测体系要严格按照要求上样量加样才能保证准确检测
如果样本体积不够可以考虑适当稀释，但需要先进行预实验确认稀释倍数是否合适
Q10:我买了你家的试剂盒，货号为E-ELIR-K001，我现在需要用自己合成的抗原包板，一抗是抗原免疫的小鼠血清，二抗是HRP Goatanti Mouse lgG(H+L)，请问我的抗原，一抗，以及二抗分别需要用什么来稀释为工作浓度呢？
抗原用包被液稀释，一抗用通用型样本稀释液或者即用型生物素化抗体稀释液，二抗用即用型HRP酶结合物稀释液体。
实验操作视频
