中文名称：RIPA裂解液 (强)

Q3:裂解液裂解不开，加入ripa后震荡，然后冰上裂解20分钟再离心，得到的是一团粘稠的液体？

RIPA裂解液裂解细胞后，细胞核内的DNA比较完整的弥散到样本里，形成一团黏糊糊的液体，遇到这种情况裂解后可再超声处理，在35~40％的功率下，超声处理样本1 min（冰浴条件下进行），超声2 s，间隔2 s，确保细胞充分裂解，降低样本粘度。

Q4:裂解液想問一下PMSF 跟Na3VO4的作用是？还有这个产品是什么浓度，如何使用？

这两个都是酶的抑制剂，作用是预防蛋白的降解。
PMSF常作为蛋白酶抑制剂被应用在生化和分子生物学实验中，是丝氨酸蛋白酶的抑制剂，可抑制胰蛋白酶（trypsin），糜蛋白酶（chymotrypsin）和AChE的活性。
Na3VO4是磷酸酶抑制剂，抑制ATP酶、碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶。
试剂盒这两个产品是100X的，使用前按照1:100的比例加入到PIPA裂解液中。

Q5:裂解液不加矾酸钠可以用吗？

如果是做磷酸化抗体，是必须加矾酸钠抑制剂，如果是做的普通抗体可以只加PMSF（蛋白酶抑制剂）。

Q6:细胞裂解液裂解细胞后续做免疫共沉淀可以吗?

不可以, 免疫共沉淀的细胞裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，常规的RIPA裂解含有SDS，会对蛋白产生变性作用，对蛋白间的相互作用有影响。做免疫共沉淀推荐使用不含变性剂的裂解液。

Q7:RIPA lysis buffer的PH7.4是在什么温度下测定的？

本产品pH值为室温下测定，25℃。

Q8:RIPA lysis buffer未开封在室温下存放了24小时能否继续使用？反复冻融的次数有限制吗？

本产品在室温下（25℃左右）放置24小时对产品效果无明显影响，可继续使用。但建议收货后立即分装并于-20℃保存，反复冻融次数不超过5次。

Q9:RIPA lysis buffer是否包含DTT或巯基乙醇等还原剂？

本产品不包含DTT、巯基乙醇等还原剂。

Q10:E-BC-R327就是这个收集细胞是怎么收集，用胰酶消化吗？还是直接刮下来拿PBS离心，消化可以吗？

悬浮细胞：将细胞悬液转移到预冷的EP管中，4°C，1000×g离心10 min去上清，用2-8°C的PBS（0.01 M，pH 7.4）洗一次，再4°C，1000×g离心10 min去上清，沉淀备用。
贴壁细胞：吸弃培养液，用2-8°C的PBS（0.01 M，pH 7.4）将细胞洗两遍。用细胞刮刮下细胞，或者用EDTA溶液处理使贴壁细胞松动，用移液器吹打下细胞，将细胞悬液转移到预冷的EP管中，4°C，1000×g离心10 min去上清，用2-8°C的PBS（0.01 M，pH 7.4）洗一次，再4°C，1000×g离心10 min去上清，沉淀备用。