RIPA Lysis Buffer (Strong)
中文名称：RIPA裂解液 (强)
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- 应用性： WB
| 产品简介 | RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液，作为Western Blot试验中从动物组织或细胞中提取蛋白的首选裂解液。 |
| 保存条件 | -20℃保存，保质期12个月。避免反复冻融。 |
| 注意事项 | 1. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4°C进行。 2. PMSF和原矾酸钠在使用前添加,每1 mL裂解液中加入10 μL PMSF和10 μL Na3VO4，使终浓度为1 mM。如发现RIPA有沉淀，请放置室温或温水浴进行溶解。 3. RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。用移液器反复吹打样本50次左右，可以有效降低样本样本粘度，离心后取上清进行后续试验。 4. 用RIPA裂解的得到的蛋白样品，因含有高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定样品的蛋白浓度，建议使用BCA法测定蛋白浓度。 5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
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IF: 3.900
| E-IR-R304A | Western Blot Detection Kit | 50 Assays |
| E-IR-R304B | High Accuracy and Absorbability Western Blot Detection Kit | 50 Assays |
Q1:这款裂解液适合提取线粒体蛋白吗？
本产品可以提取线粒体蛋白。
Q2:请问RIPA蛋白裂解液100ul差不多裂解多少细胞？
大约可裂解1*10^6个细胞，如果使用孔板操作，建议6孔板中每孔加入100-150 μL RIPA裂解液。
Q3:裂解液裂解不开，加入ripa后震荡，然后冰上裂解20分钟再离心，得到的是一团粘稠的液体？
RIPA裂解液裂解细胞后，细胞核内的DNA比较完整的弥散到样本里，形成一团黏糊糊的液体，遇到这种情况裂解后可再超声处理，在35~40％的功率下，超声处理样本1 min（冰浴条件下进行），超声2 s，间隔2 s，确保细胞充分裂解，降低样本粘度。
Q4:裂解液想問一下PMSF 跟Na3VO4的作用是？还有这个产品是什么浓度，如何使用？
这两个都是酶的抑制剂，作用是预防蛋白的降解。
PMSF常作为蛋白酶抑制剂被应用在生化和分子生物学实验中，是丝氨酸蛋白酶的抑制剂，可抑制胰蛋白酶（trypsin），糜蛋白酶（chymotrypsin）和AChE的活性。
Na3VO4是磷酸酶抑制剂，抑制ATP酶、碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶。
试剂盒这两个产品是100X的，使用前按照1:100的比例加入到PIPA裂解液中。
Q5:裂解液不加矾酸钠可以用吗？
如果是做磷酸化抗体，是必须加矾酸钠抑制剂，如果是做的普通抗体可以只加PMSF（蛋白酶抑制剂）。
Q6:细胞裂解液裂解细胞后续做免疫共沉淀可以吗?
不可以, 免疫共沉淀的细胞裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，常规的RIPA裂解含有SDS，会对蛋白产生变性作用，对蛋白间的相互作用有影响。做免疫共沉淀推荐使用不含变性剂的裂解液。
Q7:RIPA lysis buffer的PH7.4是在什么温度下测定的？
本产品pH值为室温下测定，25℃。
Q8:RIPA lysis buffer未开封在室温下存放了24小时能否继续使用？反复冻融的次数有限制吗？
本产品在室温下（25℃左右）放置24小时对产品效果无明显影响，可继续使用。但建议收货后立即分装并于-20℃保存，反复冻融次数不超过5次。
Q9:RIPA lysis buffer是否包含DTT或巯基乙醇等还原剂？
本产品不包含DTT、巯基乙醇等还原剂。
Q10:E-BC-R327就是这个收集细胞是怎么收集，用胰酶消化吗？还是直接刮下来拿PBS离心，消化可以吗？
悬浮细胞：将细胞悬液转移到预冷的EP管中，4°C，1000×g离心10 min去上清，用2-8°C的PBS（0.01 M，pH 7.4）洗一次，再4°C，1000×g离心10 min去上清，沉淀备用。
贴壁细胞：吸弃培养液，用2-8°C的PBS（0.01 M，pH 7.4）将细胞洗两遍。用细胞刮刮下细胞，或者用EDTA溶液处理使贴壁细胞松动，用移液器吹打下细胞，将细胞悬液转移到预冷的EP管中，4°C，1000×g离心10 min去上清，用2-8°C的PBS（0.01 M，pH 7.4）洗一次，再4°C，1000×g离心10 min去上清，沉淀备用。
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