产品常见问题
为了提供更好的客户支持,我们已经发布了关于Elabscience®产品的最常见问题的解答(FAQs)。
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NCBI中angiotensin II [Homo sapiens]GenBank: CAA77513.1中显示Uniprot的固定编号"P30556"的蛋白是"Type-1 angiotensin II receptor",为血管紧张素 II 1 型受体,与血管紧张素Ⅱ不是同一蛋白;
Uniprot数据库由Swiss-Prot、TrEMBL和PIR-PSD三大子数据库构成,数据主要来自于各物种基因组测序完成后得到的全基因蛋白质序列,并包含了很多来自文献中的蛋白及其功能信息。NCBI(美国国家生物技术信息中心)的数据资源来自全球几大DNA数据库,其中包括日本DNA数据库DDBJ、欧洲分子生物学实验室数据库EMBL以及其它几个知名科研机构,两者信息来源可能不一致,有时候在名称方面没有严格审核,可能有一定的出入。该指标测得是所有亚型的IFNα,也就是总的IFNα。标准品并不是所有亚型的混合物,而是人源的IFN-alpha 2a (重组蛋白,表达体系:HEK293细胞)。但由于人的15种IFN-α亚型同源性高达80%,所以我们试剂盒中所用到的抗体可识别所有亚型,另外这款试剂盒对不同亚型的IFNα做过验证,均是可以检测到的。这两款试剂盒可以用于您的细胞上清的检测的。不过ELISA检测细胞上清受到培养基组分、细胞生长情况、以及外部药物刺激条件等因素的影响,建议您正式实验前先开展预实验。
明胶酶谱法是利用SDS与样品中的MMPs的可逆性结合,将样本中的MMP-2和MMP-9分离,再通过二价金属离子缓冲体系恢复两者的活性,该试验方法是专门针对MMP-2和MMP-9的活性检测的。而ELISA是通过抗原抗体的结合反应去检测待测物的含量(即浓度),即通过MMP-2和MMP-9的特异性抗体去捕获样本的MMP-2和MMP-9。两者的实验原理不同,ELISA无法检测MMP-2和MMP-9的活性。VEGFA (VEGF)有多种亚型(剪切异构体),其中VEGF165是VEGFA最丰富和有效的亚型(P15692-4),VEGF165试剂盒检测为VEGF165A,而VEGF165B是另外一种剪切体(P15692-8)。胶原蛋白(COL1)由三条肽链组成,其中有两条链,分别是α(Ⅰ)链即COL1α1,一条 α(Ⅱ)链即COL1α2. 这两者的同源性达60.396%,不会发生明显的交叉反应。uPAR是uPA的膜结合受体,也被称为尿激酶和玻璃联素。suPAR是由膜结合的uPAR的分裂和释放引起的,是uPAR的可溶性形式。该试剂盒检测的是总的uPAR,包括膜形式及可溶性形式。哺乳动物中,APP基因位于21号染色体,共有8个亚型,其亚型一般含有365~770个氨基酸残基。最常见的是APP695、APP751和APP770,其中APP695在中枢神经中高度表达。APP属I型跨膜糖蛋白,分子量约110~130 kDa,具有较大的膜外(氨基端)结构域和较小的胞质尾区(胞内羧基端)。APP主要通过淀粉样(β途径)和非淀粉样(α途径)2种途径进行代谢。淀粉样途径即APP被β分泌酶切割成为sAPPβ和1个含有99个氨基酸的C端片段;后者进一步被γ分泌酶切割成为Aβ和ACID,这种途径生成的Aβ占Aβ总量的90%~95%,包括Aβ1-40和Aβ1-42 2种类型,其中Aβ1-40的含量较高,但Aβ1-42具有强疏水作用,其毒性较大,而且易于聚合。这些Aβ碎片会在线粒体、溶酶体以及内质网中积累,从而导致这些亚细胞器功能失调。在基于α分泌酶的非淀粉质源途径中,α分泌酶将APP切割为sAPP和1个含有83个氨基酸的C端片段,然后被γ分泌酶切割产生P3和ACID,但这些小的片段会被神经元清除掉。
APP基因突变可引起蛋白表达异常或水解改变,从而影响Aβ在细胞中的含量和组成变化。Aβ在脑内主要以Aβ40和Aβ42 2种形式存在,其中Aβ42含量虽低(<10%),但易于聚合,进而纤维化而沉积,从而形成弥散性老年斑(senile plaque),这也是AD的主要病理特征之一。而且,APP在细胞膜上经β-和γ-分泌酶切割后产生的Aβ可以引起氧化应激、钙离子内流,进而损伤线粒体,导致神经细胞障碍,激活凋亡相关蛋白和因子,最终启动细胞的凋亡程序。另外,Aβ还可以通过引起脑内炎症反应和神经纤维缠结间接导致神经元凋亡,是AD形成和发展的重要原因。大多数物质在冷冻条件下可以相对稳定,但建议使用新采集的样品进行检测,以获得更准确的结果。归纳起来PAF检测有三大类方法:①生物学检测法;②理化法;③免疫学方法。ELISA检测建议在血浆样品中加入1mM TPCK或TLCK,以抑制PAF-AH的活性。这两种属于不同类型的前列腺素。
前列腺素E2 (PGE2)是最丰富的前列腺素,是由前列腺素E合成酶作用于前列腺素H2(前列腺素H2, PGH2)产生的。
前列腺素D2(PGD2)是另外一种前列腺素,由造血和脂蛋白前列腺素D合成酶(hPGDS和lPGDS) 作用于前列腺素H2(前列腺素H2, PGH2)产生的。
除此之外,这两者的受体以及研究领域不同
PGE2:主要研究胃肠道平滑肌
PGD2:主要研究过敏性疾病如哮喘我们推荐您参考说明书中细胞样本处理方法而不建议使用0.1M的HCl裂解细胞。
由于0.1M盐酸理论上只能使细胞的通透性改变,无法裂解细胞,同时强酸的引入,会导致蛋白的变性,从而影响抗原抗体的结合,以及改变ELISA实验体系的pH值,最终影响实验结果。血小板具有特定的形态结构和生化组成,在正常血液中有较恒定的数量,在止血、伤口愈合、炎症反应、血栓形成及器官移植排斥等生理和病理过程中有重要作用。血小板只存在于哺乳动物血液中。我们这边检测正常大鼠血清血浆的血小板素时没有空腹要求。结合文献中的情况,一般是给药24h后检测大鼠血清血浆的血小板生成素,未提到大鼠要禁食的要求。建议您可以根据实验目的和文献进行参考选择。含酚红的培养基可能对睾酮检测有影响。酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用(特别是雌激素)。为避免固醇类反应及对细胞的毒性作用,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。
介绍一个小窍门:培养基在分装时,留一管加酚红,放到培养箱内平衡(可以看出PH值的变化,又可以看培养基是否污染)。在培养前放到培养箱内平衡再使用(可以避免培养时使用酚红)。