One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Green, Elab Fluor® 488)
中文名称:一步法TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒(绿色,Elab Fluor® 488)

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Price:
- 应用: 细胞凋亡-DNA片段化
检测原理 | 细胞在发生凋亡时,会激活一些特异性的DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。使得凋亡细胞的DNA被切割成180~200bp片段,在琼脂糖凝胶上通常以180~200bp的阶梯状迁移。TdT酶(脱氧核糖核酸末端转移酶)将标记的dUTP连接到断裂DNA暴露的3'-OH末端,通过在这些末端添加荧光dUTP的方式来标记晚期凋亡细胞,从而可以通过荧光显微镜进行检测。 |
检测方法 | 荧光法 |
样本类型 | 石蜡切片;冰冻切片;细胞爬片;细胞涂片 |
检测时间 | 3 hours |
检测仪器 | 荧光显微镜 |
荧光 | Elab Fluor®488 |
Ex/Em | 495/519 |
Channel set | FITC |
Filter set | FITC |
自备试剂 | 4%多聚甲醛(E-IR-R113),0.2% Triton X-100(E-IR-R122),PBS(E-BC-R187),ddH2O,含抗荧光淬灭剂的封片液(E-IR-R119),二甲苯,无水乙醇 |
保存温度 | 该产品可在-20°C避光条件下保存12个月。 |
有效期 | 12个月 |
运输条件 | 冰袋 |
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Q21:TUNEL试剂盒,为啥在染标记工作之前要先用平衡液平衡一下?
平衡的目的是为了提前让切片/爬片处于TUNEL染色的最佳条件,让TUNEL染色更加充分彻底。
Q22:TUNEL试剂盒荧光拍照的注意事项?
在调整曝光强度的过程中,可以先将光照强度调到最低,从最低的曝光时间开始观察,逐渐增加曝光时间和荧光亮度,在荧光拍摄过程中注意调整光照强度和曝光时间,曝光过度,染料容易光漂白,造成过曝,合适的曝光条件为阴性对照无背景荧光,阳性对照不过曝,不同组的同一种荧光素的曝光条件需要保持一致,但不同荧光素的曝光条件可以不同。
Q23:TUNEL试剂盒中平衡液的作用是什么?
TUNEL试剂盒中的平衡液是为了给TdT酶提供最佳反应条件。
Q24:TUNEL绿光,FITC和Elab Fluor® 488的区别是什么?
Elab Fluor® 488的抗淬灭效果比FITC好,比FITC更适应于在较长时间下的显微镜下观察。
Q25:TUNEL细胞爬片固定之后能过夜吗?
可以浸泡在PBS中于4℃过夜。
Q26:TUNEL细胞爬片可以先用多聚甲醛固定后第二天检测吗?
可以的,可以使用2~4%甲醛溶液室温固定30~60分钟,然后洗涤了之后PBS浸泡放在4度冰箱,3天内检测。
Q27:TUNEL可以用于观察黑腹果蝇组织中的细胞凋亡吗?
我司未进行过昆虫样本的TUNEL实验检测,如果客户需要用昆虫样本进行检测,可以查阅资料后进行预实验摸索实验方法。理论上是可以检测的,如果客户要做的话,可以自行摸索样本制备方法。
Q28:TUNEL原位和流式区别在哪里呢?
最主要的检测方式不同,一个用荧光显微镜检测,一个用流式细胞仪检测,其次检测样本也有所不同,原位主要检测的是石蜡切片,冰冻切片,细胞爬片或涂片。流式主要检测是细胞样本,包括悬浮细胞与贴壁细胞。
Q29:TUNEL凋亡试剂盒,可以不用爬片,用孔板来进行检测吗?
(1)不用爬片的话没法封片保存。
(2)不用爬片,用六孔板的话,试剂的用量会增加。
(3)由于孔较小,物镜的观察视野比较小。
Q30:TUNEL与免疫荧光能一起做吗?
理论上该试剂盒是可以和免疫荧光共染的,但是我司没有相关的实验验证,无法保证实验效果,建议您做一个预实验摸索一下实验条件。有几个需要注意的地方您可以留意一下:1. 针对切片样本,使用的通透剂是蛋白酶K,可能会对免疫荧光的抗原有影响;2. 石蜡切片做免疫荧光需要做高温或高压的抗原修复,这个过程可能导致DNA断裂,造成TUNEL结果假阳性。

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