One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Green, FITC)
中文名称:一步法TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒(绿色,FITC)

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Price:
- 应用: 细胞凋亡-DNA片段化
检测原理 | 细胞在发生凋亡时,会激活一些特异性的DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。使得凋亡细胞的DNA被切割成180~200bp片段,在琼脂糖凝胶上通常以180~200bp的阶梯状迁移。TdT酶(脱氧核糖核酸末端转移酶)将标记的dUTP连接到断裂DNA暴露的3'-OH末端,通过在这些末端添加荧光dUTP的方式来标记晚期凋亡细胞,从而可以通过荧光显微镜进行检测。 |
检测方法 | 荧光法 |
样本类型 | 石蜡切片;冰冻切片;细胞爬片;细胞涂片 |
检测时间 | 3 hours |
检测仪器 | 荧光显微镜 |
荧光 | FITC |
Ex/Em | 490/520 |
Channel set | FITC |
Filter set | FITC |
自备试剂 | 4%多聚甲醛(E-IR-R113),0.2% Triton X-100(E-IR-R122),PBS(E-BC-R187),ddH2O,含抗荧光淬灭剂的封片液(E-IR-R119),二甲苯,无水乙醇 |
保存温度 | 该产品可在-20°C避光条件下保存12个月。 |
有效期 | 12个月 |
运输条件 | 冰袋 |
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Q11:我使用六孔板做TUNEL实验。我的阴性对照组已经加入DNase I Buffer平衡后,还需要加标记工作液进行标记吗?
阴性对照组需要进行样本标记步骤。但需要注意的是,阴性对照组标记工作液的配置试剂和其他两组不同。
Q12:您这边推荐的冰冻切片厚度是多少呢?
一般冰冻切片的厚度是在8-10 µm,太厚了可能会做不出来。如果切片较厚,通透时可根据实际情况适当延长蛋白酶K孵育时间。
Q13:如何进行TUNEL的荧光定量分析?
A视野荧光总强度除以A视野内细胞的总面积就是平均荧光强度。DAPI染色的是总DNA,TUNEL染色的是凋亡的断裂的DNA,所以DAPI染色代表的总面积,TUNEL染色代表的凋亡的DNA,总荧光亮度除以总DNA的面积,最终就得出了平均染色比率。
Q14:含有抗荧光淬灭的封片剂(含DAPI)可以用来封片吗?
可以,如果用含DAPI的封片剂,就不需要用试剂盒中包含的DAPI染料,并且由于DAPI孵育后没有清洗,会造成较高的背景荧光。
Q15:原位TUNEL试剂盒可以直接在细胞孔板里染色吗,不制备细胞爬片?
可以做细胞爬片、细胞涂片,也可以直接在孔板里直接检测,但是需要注意的是,因为孔板的底部可能会存在中间略高四周低的情况,所以加进去的试剂一定要完全覆盖住样本,并且保证在孵育过程中不干片,必要的时候可能需要用到高于说明书写的试剂用量。用孔板直接染色,最后观察需要用倒置显微镜观察,另外还需要注意的是不做爬片的话无法封片保存,需马上观察。
Q16:冰冻切片可以烘干吗?
冰冻切片千万不要烘干,切完放在-20或者-80保存,一周内使用-20保存可以,长期不用放在-80保存。实验前取出室温复温20分钟左右,在切片上滴加4%的多聚甲醛甲醛,室温固定30-60分钟后,再洗涤,按照说明书操作。
Q17:冰冻切片冰冻前进行过固定的,还需要做一步固定,在室温孵育30min吗?
如果已经固定过,则不需要再次孵育固定,可以直接进行后续实验步骤。
Q18:六孔板每孔需要多少体积的标记工作液?
每孔建议孵育500μL的标记工作液。
Q19:做过一次TUNEL后,淬灭的切片,能再做一次吗?
不能。TUNEL的原理是将荧光标记的dUTP连接到断裂DNA的3'-OH末端上,已经做过一次TUNEL实验的切片样本,其3'-OH末端可能已经被占用了。
Q20:一步法TUNEL试剂盒可以检测精子样本吗?
可以用于检测精子样本。

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