流式课堂 | 细胞因子体外诱导表达及检测：细节不到位，实验全白

细胞因子在免疫细胞功能评估时有着不可替代的作用，然而这些关键分子在体外诱导及检测时却异常“娇气”，操作细节稍有不慎，实验结果就会南辕北辙。你是否也因此而头疼？今天Elabscience化身细节控的救星，从实验原理到闭坑指南，助你逐一拆解，告别无效实验！

一、 为什么需要进行细胞因子体外诱导表达和检测

细胞因子是一类由免疫细胞和非免疫细胞分泌的小分子蛋白，通过动态平衡的网络形式，调节免疫反应、炎症反应以及组织修复等重要生物过程。例如，M1型巨噬细胞分泌促炎性细胞因子（如TNF-α、IL-1α、IL-6等），以推动炎症反应，但持续的炎症也可能导致组织损伤。而M2型巨噬细胞则通过分泌抑炎性细胞因子（如IL-10、TGF-β）以及血管内皮生长因子（VEGF），减轻炎症并促进修复。因此，细胞因子在评估免疫细胞功能时具有不可替代的作用。

由于细胞因子为分泌性蛋白，其在细胞胞内的含量通常较低，无法通过流式细胞术直接检测，此时需要将目的细胞分选后在体外进行刺激阻断后才能进行检测。此外，为了验证特定基因或处理方式（如给药、抑制剂处理等）对目的细胞的影响，需要在体外进行诱导处理使其成为特定的细胞亚群，如诱导Th1/Th2/Th17细胞或M1/M2型巨噬细胞等，此时细胞因子的诱导表达和检测尤为重要。 

二、 进行细胞因子的体外诱导和检测时，需要注意哪些细节

虽然多数常用细胞因子模型的体外诱导模型容易在文献中搜索得到，但在实际操作过程中可能复现结果并不理想。基于Elabscience®在细胞因子诱导及检测实验中的经验，小E老师为大家总结以下几点可能的影响因素：

1、细胞的活性：某些细胞（如NK细胞、小胶质细胞）的活性易受环境的影响，因此需要更轻柔地处理细胞，尽量避免对细胞的损伤。在进行下游诱导表达前，建议进行细胞活性检测或去除死细胞，以确保实验结果的准确性；

2、细胞亚群间的相互影响：不同细胞亚群之间可能存在相互抑制或转化现象，例如TH1与TH2细胞之间相互抑制、M2型巨噬细胞可能向M1型转化。因此在选用诱导细胞时需要特别注意，如诱导Th2细胞时，选用初始CD4 T细胞的效果比总CD4 T细胞的效果更好，因为能够排除Th1的影响；

3、诱导试剂的活性：不同厂家的同一诱导试剂可能存在纯度和活性差异，需要提前确认相关信息，选用纯度和活性更高的试剂。同时，部分试剂无法反复冻融、或溶解后活性下降快或容易吸附，因此需特别注意保存条件，尽量分装保存，并尽快使用；

刺激阻断的影响：在进行细胞内的细胞因子检测时，常用刺激阻断剂进行处理。部分细胞因子对刺激阻断的处理敏感，处理后检测效果可能降低（如图1）。因此，在使用刺激阻断剂前，应确认其是否为必须操作，并优化处理时间；

图1. 刺激阻断对CD4 T细胞中IL-3检测的影响

使用磁性分选试剂盒EasySort™ Mouse CD4+T Cell Isolation Kit（MIM002N）分选小鼠CD4 T细胞后使用Mouse CD3/CD28 T Cell Activation Beads（MIM001A）激活T细胞并同时加入IL-2和IL-4进行培养，5天后直接检测细胞中IL-3的表达（左图）和刺激阻断后检测细胞中IL-3的表达（右图）。

三、 Elabscience®细胞鉴定试剂盒
在前文的实验细节中，无论是细胞活性波动、亚群相互干扰，还是试剂稳定性不足，都可能成为实验结果的“隐形杀手”。 为了解决广大科研er在细胞模型构建中遇到的问题，Elabscience®可提供细胞鉴定试剂盒系列产品，试剂盒包含分化诱导试剂和鉴定试剂，产品性能优异，结果重复性佳：

以上就是本期细胞因子体外诱导表达及检测的所有内容了，如有相关问题，欢迎小伙伴们在后台留言或在线微信联系我们，我们将及时解答！