流式课堂 | 精准解析小鼠T细胞状态：从初始到效应与记忆的全方位检测方案

T细胞作为免疫系统的核心力量，其分化与活化状态直接影响抗肿瘤、抗感染及免疫治疗的效果。在CAR-T、TCR-T等免疫疗法研发中，精准区分小鼠T细胞亚群（初始T细胞Tn、效应T细胞Teff、记忆T细胞Tmem）及活化状态，对优化治疗方案至关重要。

本期推文，Elabscience将介绍如何利用多色流式细胞术，结合前沿标志物，精准解析T细胞活化状态，助力您的免疫研究更上一层楼！

1.  小鼠T细胞亚群分类与关键标志物

T细胞的分化与功能状态可通过特定表面分子进行鉴定：

2. 实验方案

2.1 动物模型

根据小鼠体重，将一定剂量的LPS（5 mg/kg）溶液通过腹腔注射到小鼠体内，继续喂养七天。

2.2 样本制备

1) 将正常和模型小鼠颈椎脱臼处死后，取小鼠脾脏；

2) 制备单细胞悬液：在70 μm细胞筛网上研磨小鼠脾脏，以预冷的PBS冲洗细胞筛网，收集细胞悬液于15 mL离心管中，300 g，离心5 min；

3) 每只小鼠脾脏加入2 mL现配的1×ACK Lysis Buffer，轻轻吹打混匀，室温裂解2 min；

注：自备10× ACK Lysis Buffer（E-CK-A105），使用去离子水稀释至1×，现配现用，10×ACK Lysis Buffer和去离子水在使用前需4℃预冷。

4) 裂解完成后，迅速加入10 mL PBS缓冲液终止裂解，300×g离心5 min；

5) 离心完成后弃上清，用1 mL培养基将脾脏细胞重悬，细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤于2 mL EP管，稀释后计数。

2.3多色流式染色

1) 用1×PBS分别将正常对照组和模型组样本制备成单细胞悬液，并调整细胞密度为1×107/mL；

2) 分别取100 μL 细胞悬液，加入CD3，CD4，CD44，CD62L抗体，4℃避光孵育30 min；

3) 孵育完成后，加入1-2 mL Cell Staining Buffer混匀，300×g 离心5 min，弃上清；

4) 加入100-200 μL Cell Staining Buffer 重悬细胞，上机检测。

流式抗体信息：

3. 结果展示

图1. 正常小鼠（对照组）和模型小鼠（模型组）样本中T细胞亚群

4. 应用拓展

T细胞作为适应性免疫的核心执行者，其功能状态与能量代谢紧密相关。T细胞激活后，其代谢重编程过程可通过关键代谢参数细胞外酸化率（ECAR）和氧消耗量率（OCR）的变化直观反映。

使用Mouse CD3/CD28 T Cell Activation Beads激活小鼠CD4+T细胞，利用代谢试剂盒监测能量代谢指标的变化。以下为实验结果示例：

图2. 采用细胞外酸化率（ECAR）荧光法测试盒（E-BC-F069）检测静息状态和激活后的T细胞

图3. 采用氧消耗率（OCR）荧光法测试盒（E-BC-F068）检测静息状态和激活后的T细胞

图4：采用ATP含量化学发光法测试盒（E-BC-F002）检测静息状态和激活后的T细胞

激活与未激活T细胞，能量代谢总结

5. Elabscience®相关产品推荐

通过上述多色流式细胞术和前沿标志物检测方案，我们可精准解析小鼠 T 细胞亚群及活化状态，加速免疫研究进程。如有相关疑问，欢迎评论区留言。【流式课堂】专栏将继续带来T细胞检测干货，请持续关注~