Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (with JC-1)
中文名称:线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)

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- 应用: 细胞凋亡-JC-1
检测原理 | 线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件,发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体膜电位崩溃,细胞凋亡便不可逆转。
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位 Ψm的理想荧光探针,可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1有单体和多聚体两种存在形式,两者发射光谱不同。在正常细胞内,线粒体膜电位较高,JC-1聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可产生红色荧光;凋亡早期,线粒体膜电位降低,JC-1不能聚集在线粒体基质中,此时JC-1为单体,可产生绿色荧光。
通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可检测到细胞膜电位的下降,可将JC-1荧光颜色的转变作为细胞凋亡早期的检测指标。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
JC-1单体的最大激发波长为514 nm,最大发射波长为529 nm;JC-1聚合物的最大激发波长为585 nm,最大发射波长为590 nm。实际观察时,常规设置红色荧光和绿色荧光即可。 |
检测方法 | 荧光法;流式 |
样本类型 | 细胞 |
检测时间 | 40min |
检测仪器 | 流式细胞仪;荧光显微镜 |
荧光 | JC-1 |
Ex/Em | 514/529, 585/590 |
Channel set | FITC, PE |
自备试剂 | 超纯水 |
保存温度 | 该产品可在2~8°C/-20°C避光条件下保存12个月,具体试剂组分的保存条件请参考说明书。 |
有效期 | 12个月 |
运输条件 | 冰袋 |
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Q1:测JC-1和ROS的组织样本放干冰里冻了还能用流式检测吗?还有别的办法吗?
组织样本用干冰冻了之后,基本上细胞形态可能已经被破坏了,无法使用流式检测。可以看看相关研究的ELISA或者代谢的指标,比如凋亡的Bax,Caspase或者氧化应激的SOD,MDA等。
Q2:样本带绿光能用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位吗?
样本带绿色荧光不太适合用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,因为GFP荧光对FITC和PE通道都有干扰,建议用与GFP没有荧光溢漏的线粒体探针进行检测。
Q3:如果细胞带GFP可以用E-CK-A301产品吗?
JC-1是需要同时检测FL1和FL2通道的变化来确定线粒体膜电位的变化的,与GFP存在荧光干扰,因此细胞带GFP的话是不能适用此款试剂盒的。
Q4:同一批细胞做JC-1有阳性,检测TUNEL无阳性,这是为什么呢?
您好,JC-1主要是检测线粒体膜电位变化的,但线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性时间,发生在细胞核凋亡特征出现之前,所以这说明了您细胞正处于凋亡发生早期而还未进入凋亡晚期。
Q5:可以用JC-1检测心脏组织样本线粒体膜电位吗?
我们不建议用组织样本制备单细胞悬液去做JC-1,制备单细胞悬液的操作对细胞的影响较大,会直接影响JC-1的实验结果。
Q6:可以把线粒体提取出来做JC-1吗?
理论上是可行的,但是我们也没有验证过。JC-1的用量以及提取的线粒体的用量我们这边确定不了,可能需要摸索优化。
Q7:做JC-1的时候是不是只要看红色荧光就可以了,不用绿色荧光?
JC-1 有单体和多聚体两种存在形式,两者发射光谱不同。在正常细胞内,线粒体膜电位较高,JC-1 聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可产生红色荧光;凋亡早期,线粒体膜电位降低,JC-1 不能聚集在线粒体基质中,此时 JC-1 为单体,可产生绿色荧光。因此,红色荧光和绿色荧光都是需要观察的。
Q8:Mito-Tracker Green可以用JC-1替代吗?
不能。Mito-Tracker Green是一种线粒体(mitochondria)绿色荧光探针,可以用于活细胞线粒体特异性荧光染色,而且对于线粒体的染色不依赖于线粒体膜电位。
Q9:JC-1这个结果图为什么是斜的?
在正常细胞和凋亡细胞中,都有JC-1的单体和聚合物存在。细胞逐渐凋亡的过程中,JC-1慢慢由聚合物解离变成单体,聚合物和单体的比例发生了变化。所以画门的时候普遍聚集在第三象限,画门区分正常细胞和凋亡细胞的时候需要在第三象限划分。
Q10:JC-1试剂盒能检测组织样本或是组织切片样本吗?
JC-1检测试剂盒不建议用于组织样本,因为组织样本在制备成细胞悬液的过程中,可能会由于机械操作导致细胞凋亡或损伤,这种情况下JC-1的结果可能不准确。另外,此试剂盒只能检测活的单细胞悬液,不能用于切片样本。
