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Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (with JC-1)

中文名称:线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)

Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (with JC-1)
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  • Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (with JC-1)
  • Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (with JC-1)
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Price: ¥800.00 ¥500.00 ¥260.00

Size:
100 Assays 50 Assays 20 Assays
  • 应用: 细胞凋亡-JC-1
检测原理
线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件,发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体膜电位崩溃,细胞凋亡便不可逆转。 JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位 Ψm的理想荧光探针,可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1有单体和多聚体两种存在形式,两者发射光谱不同。在正常细胞内,线粒体膜电位较高,JC-1聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可产生红色荧光;凋亡早期,线粒体膜电位降低,JC-1不能聚集在线粒体基质中,此时JC-1为单体,可产生绿色荧光。 通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可检测到细胞膜电位的下降,可将JC-1荧光颜色的转变作为细胞凋亡早期的检测指标。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。 JC-1单体的最大激发波长为514 nm,最大发射波长为529 nm;JC-1聚合物的最大激发波长为585 nm,最大发射波长为590 nm。实际观察时,常规设置红色荧光和绿色荧光即可。
检测方法
荧光法;流式
样本类型
细胞
检测时间
40min
检测仪器
流式细胞仪;荧光显微镜
荧光
JC-1
Ex/Em
514/529, 585/590
Channel set
FITC, PE
自备试剂
超纯水
保存温度
该产品可在2~8°C/-20°C避光条件下保存12个月,具体试剂组分的保存条件请参考说明书。
有效期
12个月
运输条件
冰袋
本试剂盒检测喜树碱诱导的Jurkat细胞凋亡效果如图所示:正常细胞(左)存在少量凋亡,表现为出现少量线粒体膜电位崩塌细胞;诱导凋亡细胞(中, 2.5 μM喜树碱处理Jurkat细胞24 h)出现大量线粒体膜电位崩塌细胞;CCCP处理细胞(右,阳性对照)几乎所有细胞线粒体膜电位崩塌。
本试剂盒检测Hela细胞的线粒体膜电位变化:control(上),表现为极少量凋亡细胞;10 μM camptothecin(下)处理Hela细胞24 h,出现大量线粒体膜电位崩塌的凋亡细胞。
本试剂盒检测Hela细胞的线粒体膜电位变化:control(上),表现为少量线粒体膜电位崩塌细胞;10 μM CCCP(下)处理Hela细胞40 min,出现大量线粒体膜电位崩塌细胞。
E-CK-A211 Annexin V-FITC/PI Apoptosis Kit 200 Assays , 100 Assays , 50 Assays , 20 Assays
E-CK-A320 One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Green, FITC) 100 Assays , 50 Assays , 20 Assays
E-CK-A362 Enhanced Cell Counting Kit 8 (WST-8/CCK8) 500 Tests , 100 Tests , 500 Tests × 20

Q1:测JC-1和ROS的组织样本放干冰里冻了还能用流式检测吗?还有别的办法吗?

组织样本用干冰冻了之后,基本上细胞形态可能已经被破坏了,无法使用流式检测。可以看看相关研究的ELISA或者代谢的指标,比如凋亡的Bax,Caspase或者氧化应激的SOD,MDA等。

Q2:样本带绿光能用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位吗?

样本带绿色荧光不太适合用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,因为GFP荧光对FITC和PE通道都有干扰,建议用与GFP没有荧光溢漏的线粒体探针进行检测。

Q3:如果细胞带GFP可以用E-CK-A301产品吗?

JC-1是需要同时检测FL1和FL2通道的变化来确定线粒体膜电位的变化的,与GFP存在荧光干扰,因此细胞带GFP的话是不能适用此款试剂盒的。

Q4:同一批细胞做JC-1有阳性,检测TUNEL无阳性,这是为什么呢?

您好,JC-1主要是检测线粒体膜电位变化的,但线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性时间,发生在细胞核凋亡特征出现之前,所以这说明了您细胞正处于凋亡发生早期而还未进入凋亡晚期。

Q5:可以用JC-1检测心脏组织样本线粒体膜电位吗?

我们不建议用组织样本制备单细胞悬液去做JC-1,制备单细胞悬液的操作对细胞的影响较大,会直接影响JC-1的实验结果。

Q6:可以把线粒体提取出来做JC-1吗?

理论上是可行的,但是我们也没有验证过。JC-1的用量以及提取的线粒体的用量我们这边确定不了,可能需要摸索优化。

Q7:做JC-1的时候是不是只要看红色荧光就可以了,不用绿色荧光?

JC-1 有单体和多聚体两种存在形式,两者发射光谱不同。在正常细胞内,线粒体膜电位较高,JC-1 聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可产生红色荧光;凋亡早期,线粒体膜电位降低,JC-1 不能聚集在线粒体基质中,此时 JC-1 为单体,可产生绿色荧光。因此,红色荧光和绿色荧光都是需要观察的。

Q8:Mito-Tracker Green可以用JC-1替代吗?

不能。Mito-Tracker Green是一种线粒体(mitochondria)绿色荧光探针,可以用于活细胞线粒体特异性荧光染色,而且对于线粒体的染色不依赖于线粒体膜电位。

Q9:JC-1这个结果图为什么是斜的?

在正常细胞和凋亡细胞中,都有JC-1的单体和聚合物存在。细胞逐渐凋亡的过程中,JC-1慢慢由聚合物解离变成单体,聚合物和单体的比例发生了变化。所以画门的时候普遍聚集在第三象限,画门区分正常细胞和凋亡细胞的时候需要在第三象限划分。

Q10:JC-1试剂盒能检测组织样本或是组织切片样本吗?

JC-1检测试剂盒不建议用于组织样本,因为组织样本在制备成细胞悬液的过程中,可能会由于机械操作导致细胞凋亡或损伤,这种情况下JC-1的结果可能不准确。另外,此试剂盒只能检测活的单细胞悬液,不能用于切片样本。

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