One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Green, FITC)
中文名称:一步法TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒(绿色,FITC)

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Price:
- 应用: 细胞凋亡-DNA片段化
检测原理 | 细胞在发生凋亡时,会激活一些特异性的DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。使得凋亡细胞的DNA被切割成180~200bp片段,在琼脂糖凝胶上通常以180~200bp的阶梯状迁移。TdT酶(脱氧核糖核酸末端转移酶)将标记的dUTP连接到断裂DNA暴露的3'-OH末端,通过在这些末端添加荧光dUTP的方式来标记晚期凋亡细胞,从而可以通过荧光显微镜进行检测。 |
检测方法 | 荧光法 |
样本类型 | 石蜡切片;冰冻切片;细胞爬片;细胞涂片 |
检测时间 | 3 hours |
检测仪器 | 荧光显微镜 |
荧光 | FITC |
Ex/Em | 490/520 |
Channel set | FITC |
Filter set | FITC |
自备试剂 | 4%多聚甲醛(E-IR-R113),0.2% Triton X-100(E-IR-R122),PBS(E-BC-R187),ddH2O,含抗荧光淬灭剂的封片液(E-IR-R119),二甲苯,无水乙醇 |
保存温度 | 该产品可在-20°C避光条件下保存12个月。 |
有效期 | 12个月 |
运输条件 | 冰袋 |
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E-CK-A321 | One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Green, Elab Fluor® 488) | 100 Assays , 50 Assays , 20 Assays |
E-CK-A362 | Enhanced Cell Counting Kit 8 (WST-8/CCK8) | 500 Tests , 100 Tests , 500 Tests × 20 |
Q1:请问做tunel染色需要烤片吗?不烤片的话不会脱片吗?
制作石蜡切片的过程需要烤片,但是切片制作完毕之后做tunel染色的过程不需要烤片。
Q2:该如何给客户推荐合适的TUNEL原位凋亡试剂盒(荧光法)?
①实验样本不含荧光,所有的TUNEL试剂盒都可以使用。②如果实验样品带红光,推荐选用One-step TUNEL Assay Kit (Green, FITC) 货号:E-CK-A320或者One-step TUNEL Assay Kit (Green, Elab Fluor®488) 货号:E-CK-A320。
一般来说,Elab Fluor®488的抗淬灭效果优于FITC,如果需要长时间观察样本的绿色荧光推荐使用One-step TUNEL Assay Kit (Green, Elab Fluor®488)。
③如果实验样本带绿光,推荐选用One-step TUNEL Assay Kit (Red, Elab Fluor®594) 货号:E-CK-A322或者One-step TUNEL Assay Kit (Red, Elab Fluor®555) 货号:E-CK-A325。Elab Fluor®594与GFP的干扰更小,如果样本所带绿色荧光较强,优先推荐选择One-step TUNEL Assay Kit (Red, Elab Fluor®594) 货号:E-CK-A322。
④如果实验样品中同时有红色荧光和绿色荧光,推荐选用One-step TUNEL Assay Kit (Red, Elab Fluor®647) 货号:E-CK-A324,但是Elab Fluor®647对荧光显微镜要求比较高,需要显微镜配置有Cy5或Elab Fluor®647滤光片,一般共聚焦显微镜配置有该滤光片。
Q3:脱蜡干净的状态是什么样的呢?
组织透明,玻片不挂水即为脱蜡干净。
Q4:细胞样本没有做成涂片和爬片,而是直接固定渗透,可以用TUNEL试剂盒检测吗?
可以,客户可以将细胞收集到EP管中,按实验步骤进行后续操作,最后用流式细胞仪上机检测,或是吸取细胞悬液到载玻片上用显微镜观察。
Q5:组织切片封片可以使用中性树胶吗?
不能用中性树胶,因为切片染色完毕后,是处于水溶性状态,要用水溶性的封片剂,中性树胶是非水溶性封片剂,封片了之后会糊成一团,片子被破坏,用抗荧光淬灭封片剂来封片即可。
Q6:石蜡切片已经脱蜡通透了,能不能放到第二天再染色?
可以洗涤后浸泡在PBS中,放在4℃冰箱保存。
Q7:标记步骤中需要滴加多少体积的DAPI工作液呢?
DAPI染色时要求DAPI工作液覆盖样本即可。
Q8:有哪些原因会造成TUNEL假阳性呢?
具有高增殖或代谢活性细胞群,可能会存在DNA链的断裂,在这两种情况下,假阳性结果可能是样本本身带来的。当客户对结果的解释存疑时,细胞形态学的评价是一个重要的参数。
Q9:我用重金属溶液处理完福寿螺幼螺之后直接液氮速冻-80度保存了,那我保存的这个样品还可以用于tunel检测吗?
可以的,这个-80冻存的样本可以制作成冰冻切片,然后用冰冻切片做tunel检测即可。
Q10:我想问一下就是您家有个TUNEL产品能测红细胞凋亡吗?
TUNEL试剂盒是检测DNA的片段化,红细胞无细胞核,也无线粒体等细胞器,因此不能检测红细胞的凋亡。
