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One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Red, Elab Fluor® 647)

中文名称:一步法TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒(红色,Elab Fluor® 647)

One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Red, Elab Fluor® 647)
  • One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Red, Elab Fluor® 647)
  • One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Red, Elab Fluor® 647)
  • One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Red, Elab Fluor® 647)
  • One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Red, Elab Fluor® 647)
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Price: ¥3600.00 ¥2000.00 ¥1500.00

Size:
100 Assays 50 Assays 20 Assays
  • 应用: 细胞凋亡-DNA片段化
检测原理
细胞在发生凋亡时,会激活一些特异性的DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。使得凋亡细胞的DNA被切割成180~200bp片段,在琼脂糖凝胶上通常以180~200bp的阶梯状迁移。TdT酶(脱氧核糖核酸末端转移酶)将标记的dUTP连接到断裂DNA暴露的3'-OH末端,通过在这些末端添加荧光dUTP的方式来标记晚期凋亡细胞,从而可以通过荧光显微镜进行检测。
检测方法
荧光法
样本类型
石蜡切片;冰冻切片;细胞爬片;细胞涂片
检测时间
3 hours
检测仪器
激光共聚焦显微镜(或有Cy5滤光片的荧光显微镜)
荧光
Elab Fluor®647
Ex/Em
650/665
Filter set
Cy5
自备试剂
4%多聚甲醛(E-IR-R113),0.2% Triton X-100(E-IR-R122),PBS(E-BC-R187),ddH2O,含抗荧光淬灭剂的封片液(E-IR-R119),二甲苯,无水乙醇
保存温度
该产品可在-20°C避光条件下保存12个月。
有效期
12个月
运输条件
冰袋
Paraffin embedded rat heart was treated with DNase I to fragment the DNA. DNA strand breaks showed intense fluorescent staining in DNase I treated sample (red). The cells were counterstained with DAPI (blue).This photo was taken by confocal microscope.
Paraffin embedded rat brain was treated with DNase I to fragment the DNA. DNA strand breaks showed intense fluorescent staining in DNase I treated sample (red). The cells were counterstained with DAPI (blue).This photo was taken by confocal microscope.
Paraffin embedded mouse lung was treated with DNase I to fragment the DNA. DNA strand breaks showed intense fluorescent staining in DNase I treated sample (red). The cells were counterstained with DAPI (blue).This photo was taken by confocal microscope.
Fluorescence microscope analysis of camptothecin-induced apoptosis of Hela cells.
Mixed samples of normal mouse spleen cells and DNase I treated mouse spleen cells were stained.
E-CK-A211 Annexin V-FITC/PI Apoptosis Kit 200 Assays , 100 Assays , 50 Assays , 20 Assays
E-CK-A301 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (with JC-1) 100 Assays , 50 Assays , 20 Assays
E-CK-A362 Enhanced Cell Counting Kit 8 (WST-8/CCK8) 500 Tests , 100 Tests , 500 Tests × 20

Q1:请问做tunel染色需要烤片吗?不烤片的话不会脱片吗?

制作石蜡切片的过程需要烤片,但是切片制作完毕之后做tunel染色的过程不需要烤片。

Q2:该如何给客户推荐合适的TUNEL原位凋亡试剂盒(荧光法)?

①实验样本不含荧光,所有的TUNEL试剂盒都可以使用。②如果实验样品带红光,推荐选用One-step TUNEL Assay Kit (Green, FITC) 货号:E-CK-A320或者One-step TUNEL Assay Kit (Green, Elab Fluor®488) 货号:E-CK-A320。
一般来说,Elab Fluor®488的抗淬灭效果优于FITC,如果需要长时间观察样本的绿色荧光推荐使用One-step TUNEL Assay Kit (Green, Elab Fluor®488)。
③如果实验样本带绿光,推荐选用One-step TUNEL Assay Kit (Red, Elab Fluor®594) 货号:E-CK-A322或者One-step TUNEL Assay Kit (Red, Elab Fluor®555) 货号:E-CK-A325。Elab Fluor®594与GFP的干扰更小,如果样本所带绿色荧光较强,优先推荐选择One-step TUNEL Assay Kit (Red, Elab Fluor®594) 货号:E-CK-A322。
④如果实验样品中同时有红色荧光和绿色荧光,推荐选用One-step TUNEL Assay Kit (Red, Elab Fluor®647) 货号:E-CK-A324,但是Elab Fluor®647对荧光显微镜要求比较高,需要显微镜配置有Cy5或Elab Fluor®647滤光片,一般共聚焦显微镜配置有该滤光片。

Q3:脱蜡干净的状态是什么样的呢?

组织透明,玻片不挂水即为脱蜡干净。

Q4:细胞样本没有做成涂片和爬片,而是直接固定渗透,可以用TUNEL试剂盒检测吗?

可以,客户可以将细胞收集到EP管中,按实验步骤进行后续操作,最后用流式细胞仪上机检测,或是吸取细胞悬液到载玻片上用显微镜观察。

Q5:组织切片封片可以使用中性树胶吗?

不能用中性树胶,因为切片染色完毕后,是处于水溶性状态,要用水溶性的封片剂,中性树胶是非水溶性封片剂,封片了之后会糊成一团,片子被破坏,用抗荧光淬灭封片剂来封片即可。

Q6:石蜡切片已经脱蜡通透了,能不能放到第二天再染色?

可以洗涤后浸泡在PBS中,放在4℃冰箱保存。

Q7:标记步骤中需要滴加多少体积的DAPI工作液呢?

DAPI染色时要求DAPI工作液覆盖样本即可。

Q8:有哪些原因会造成TUNEL假阳性呢?

具有高增殖或代谢活性细胞群,可能会存在DNA链的断裂,在这两种情况下,假阳性结果可能是样本本身带来的。当客户对结果的解释存疑时,细胞形态学的评价是一个重要的参数。

Q9:我用重金属溶液处理完福寿螺幼螺之后直接液氮速冻-80度保存了,那我保存的这个样品还可以用于tunel检测吗?

可以的,这个-80冻存的样本可以制作成冰冻切片,然后用冰冻切片做tunel检测即可。

Q10:我想问一下就是您家有个TUNEL产品能测红细胞凋亡吗?

TUNEL试剂盒是检测DNA的片段化,红细胞无细胞核,也无线粒体等细胞器,因此不能检测红细胞的凋亡。

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