Annexin V-PE/Cyanine5/DAPI Apoptosis Kit
中文名称：Annexin V-PE/Cyanine5 / DAPI细胞凋亡检测试剂盒
Price:
- 应用： 细胞凋亡-Annexin V
| 检测原理 | Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记荧光染料，利用流式细胞仪检测细胞凋亡。
细胞核染料（PI,DAPI,7-AAD）可与双链DNA特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，细胞核染料（DAPI、PI、7-AAD）可进入细胞内对DNA进行染色，与Annexin V搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。 |
| 检测方法 | 荧光法;流式 |
| 样本类型 | 细胞 |
| 检测时间 | 40 min |
| 检测仪器 | 流式细胞仪 |
| 荧光 | PE/Cyanine 5 |
| Ex/Em | 495;565;655/670 |
| Channel set | PerCP/Cy5.5 |
| 自备试剂 | PBS(E-BC-R187), 去离子水 |
| 保存温度 | 该产品可在 2~8°C避光条件下保存12个月。 |
| 有效期 | 12个月 |
| 运输条件 | 冰袋 |
| E-CK-A151 | Annexin V Binding Buffer (10×) | 50 mL , 10 mL |
| E-CK-A301 | Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (with JC-1) | 100 Assays , 50 Assays , 20 Assays |
| E-CK-A123 | Annexin V-PE/Cyanine5 Reagent | 500 Tests , 200 Tests , 100 Tests , 50 Tests |
| E-CK-A320 | One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Green, FITC) | 100 Assays , 50 Assays , 20 Assays |
Q1:目前所有Annexin V试剂盒针对10^6细胞，都是1T当做2T使用吗？
1T当做2T用可以，按照说明书两步法操作，但细胞量不要超过5 x10^5个细胞。
Q2:检测贴壁细胞时，需收集诱导凋亡后产生的悬浮细胞，并与后续收集的贴壁细胞一起检测，这句话该怎么理解呢？
因为在培养过程中，凋亡的细胞贴壁不牢，会大量漂浮在培养液中。为了结果的准确性，通常建议客户在检测凋亡时将悬浮的细胞与胰酶消化后的细胞都收集起来一起检测。
Q3:是否可以用PBS替代Annexin V试剂盒中的Binding Buffer？
不可以，因为Annexin V与磷脂酰丝氨酸（PS）的结合依赖Ca2+，而常见的PBS溶液中不含Ca2+，而Binding Buffer 含有Ca2+，可以促进Annexin V与PS的结合。不加Binding Buffer，会导致Annexin V的结合能力降低，造成阳性信号大幅下降甚至无阳性信号。
Q4:我的所有样本都没有明显凋亡，该怎么诱导凋亡作为阳性对照呢？
对照组细胞可通过以下两种方法诱导凋亡：①由于不同细胞受DMSO的影响程度不同，所以建议通过预实验摸索DMSO的作用时间或体积分数，可以先按以下体积分数（10%）摸索作用时间，每30min镜检一次。②未转染的细胞在50~60℃的水浴锅中水浴5~10min。当细胞形态变化或大量漂浮，可认为产生凋亡细胞群。
Q5:大鼠海马神经元凋亡，如何设门？
正常我们做Annexin V一般是做细胞系样本，圈门就只圈除碎片的以外的有效细胞，组织样本中由于细胞种类会多一些，具体看老师想检测整个组织样本的凋亡还是只检测其中某种细胞的凋亡，只检测某种细胞的凋亡有时还需要跟一些特异性的流式指标染色，先圈出细胞群再去看凋亡，有一些细胞群也能在FSC/SSC中直接圈出，不过群的位置也需要反圈门去确定。还有一点就是组织样本的处理也比较关键。处理不好可能会导致由于样本处理而导致的假阳性。
Q6:Binding buffer可以用含钙离子的PBS替代吗?
不能，binding buffer里的钙离子浓度是经过实验摸索后确定的，含钙离子的PBS不一定会有binding buffer的作用和效果。
Q7:Annexin V能不能用荧光显微镜检测？
Annexin V做荧光显微镜是可以原位观察细胞凋亡的，但是有一个缺点：凋亡的细胞的粘附能力会下降，出现贴壁不牢或悬浮的情况，这样会导致细胞观测时检测不到。Annexin V荧光双染细胞凋亡检测试剂盒实验操作指南：https://www.elabscience.cn/resource-cell_function-detail-293
Q8:Annexin V，我用含EDTA的胰酶处理细胞，会不会受影响？
可以用含EDTA的胰酶消化，消化后正常用PBS把EDTA清洗掉即可。
Q9:Annexin V试剂盒能否用于贴壁细胞？
Annexin V试剂盒可以用于贴壁细胞，但是需要注意以下几点：
1. 贴壁细胞诱导细胞凋亡时出现的漂浮细胞也是需要收集起来的，与后续收集的贴壁细胞一起检测。
2. 消化贴壁细胞要操作轻柔，避免人为操作带来的细胞损伤。
3. 胰酶消化的时间要适宜。尽量不使用含EDTA的胰酶，因为EDTA会影响Annexin V与PS的结合。如果一定要用含EDTA的胰酶，终止消化后要将细胞洗涤干净，尽量去除EDTA。
Q10:Annexin V试剂盒能否检测血液样本？
不建议检测血液样本，血液中血小板及很多免疫细胞自身存在PS外翻的情况，会影响检测结果。
