产品常见问题
为了提供更好的客户支持，解决客户关于流式抗体相关知识的疑问，我们整理并发布了关于流式抗体的最常见问题的解答（FAQs），并将持续更新。
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有红细胞的样本，需要用到红细胞裂解液，裂解红细胞（E-CK-A105）；
Fc受体丰富的细胞如巨噬细胞，在加入流式抗体前需要先封闭FC受体，以减少抗体的非特异性结合，目前我司只有人和小鼠的封闭剂，E-AB-F1236A Purified Anti-Human CD16 Antibody[3G8] ，E-AB-F0997A Purified Anti-Mouse CD16/32 Antibody[2.4G2]。
细胞染色过程中需要使用细胞染色缓冲液（E-CK-A107）；
胞内指标的检测需要针对胞内指标检测的固定破膜液（E-CK-A109），核内指标的检测需要针对核内指标检测的固定破膜液（E-CK-A108）；
对于肿瘤等组织样本进行流式检测的时候，还会用到死细胞染料。巨噬细胞、树突状细胞、NK细胞等等会表达Fc受体的，在流式实验抗体染色过程中，抗体Fc段会与细胞表面的Fc受体进行结合，从而产生非特异性的染色结果，以及使用含花青素的染料，如PE/Cy7标记的抗体也会有非特异性的染色结果，最终导致流式实验结果中有假阳性的存在。可以不用洗直接孵育抗体。使用方法是：100 μL体积细胞悬液（1x10^6 cells）中加入0.5-1 μg，即1 μL-2 μL，室温下孵育10分钟。像巨噬细胞这种Fc受体丰富的细胞建议加2 μL进行封闭。细胞染色缓冲液主要作用可以保持细胞活力，使细胞变得稳定并且对损伤不太敏感；使pH敏感荧光染料产生的荧光信号强度最大化；减少抗体与靶细胞的非特异性结合；螯合金属阳离子，减少细胞之间的粘连。可以用1%BSA的PBS溶液替代。一个样本大概需要1.5 mL细胞染色缓冲液。空白对照：用来设定各个通道的电压。
同型对照：同型对照抗体作为阴阳性细胞的断定依据，尤其是低表达或连续表达的指标，数据分析的时候不好圈门，同型对照抗体是必不可少的对照。
单染管对照：流式多色实验中，如果各个通道的荧光之间有干扰，需要单独做每个荧光的单染管用来调补偿。
FMO对照：FMO对照又称为荧光减一对照，指的是多色实验时，要检测某个荧光通道的表达情况，由于荧光渗漏影响占主要，所以检测时先将该通道的抗体去掉，检测一下其它通道漏到此通道的背景荧光水平，进行正确排除，从而帮助设门。
我们在官网上有详细说明，点击此处跳转查看同型对照抗体用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面Fc受体等而产生的背景染色，能够作为阴阳性细胞的判断依据，尤其是低表达或连续表达的指标，数据分析的时候不好圈门，同型对照抗体是必不可少的对照。
同型对照是与染色的单克隆抗体①相同种属来源②相同免疫球蛋白及亚型③相同荧光素标记④相同剂量和浓度⑤由未免疫动物血清纯化而来。
我们在官网上有详细说明，点击此处跳转查看Test包装的抗体我们在细胞模型上验证时对抗体的使用量做过滴度摸索和优化的，所以是不需要稀释的。一管细胞样本{100μL的细胞悬液（1x10^6个细胞）}加入1 Test（5μL）的抗体就可以了。Test包装的抗体在细胞模型上对抗体的使用量做过滴定摸索和优化的，而μg包装没有对抗体的使用量做过滴定摸索和优化实验，所以需要根据已知的抗体浓度以及细胞样本情况做抗体滴定实验去摸索最优的抗体使用量。抗体用量跟孵育体系有关，如果细胞悬液体积仍然是100 μL的话，抗体用量是不变的，若想节省抗体用量可以减小细胞悬液体积，抗体用量可以按比例减少。建议使用推荐的细胞量进行实验，若细胞数量过多，会导致抗体用量不够，造成假阴性，若细胞量太少的话，尤其是在做胞内或者核内指标时，大量的离心操作会损失很多细胞，导致最终检测的细胞数量不够。标记后的流式抗体因其偶联的荧光素不同，其稳定性也有差异，建议通过预实验来验证冻融后的抗体后再确定，比如FITC的稳定性优于串联染料，无论何种荧光素，都应避免反复冻融。抗体在运输过程中，抗体会因为颠簸沾到管壁管盖上，所以收到抗体后适度离心一下将管壁管盖上的抗体收集至管底，避免抗体有所损失。宿主物种指的是抗体来源的种属信息；物种反应性指的是经实验验证，能与我们的抗体产生特异性结合的种属。
