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产品常见问题

为了提供更好的客户支持,解决客户关于流式抗体相关知识的疑问,我们整理并发布了关于流式抗体的最常见问题的解答(FAQs),并将持续更新。

  • 这两种样本制备的顺序都是可以应用的。先裂红再染色可以减少杂细胞,使抗体和抗原的特异性结合效率更高;而先染色再裂红可以减少离心次数,可以更大程度地保留细胞数,更适合细胞量少的样本或珍稀样本。另外,先染色再裂红可能会影响某些指标的表达,如CD122、CD200、CD56、CD183、IGM等。这些指标建议先裂红再加抗体,染色效果会更好。客户可以根据自己的情况选择最合适的方法。

    如果研究的指标里就含有FcR(如FcrRII/III),那么需要先孵育anti-FcrRII/III antibody流式抗体,再孵育FcR封闭剂,最后孵育其他抗体。

    流式实验建议用新鲜细胞做。如果您这边情况特殊,只能建议您先将制备好的单细胞悬液用4%多聚甲醛固定30min,然后用PBS洗涤两遍,保存在细胞染色缓冲液(可以用1 %BSA的PBS替代)中,置于4°C保存,试剂收到后尽快检测。

    后续需要进行细胞培养操作的实验都需要使用无菌耗材,如胞内因子检测或流式分选实验。

    理论上可以一起做,但我们还是建议针对不同的实验选择相应的破膜剂。固定破核膜剂的破膜能力比较强,可以破核膜和胞膜,对核因子的检测效果更好,但可能会破坏胞膜上的一些特异性结合位点。固定破胞膜剂相对比较温和,适用于表达在细胞质上的抗原检测。

    抗体亚型是基于免疫球蛋白(Ig)的分子结构和功能特性进行的进一步细分。在哺乳动物中,Ig的重链一共有五种,分别用希腊字母α、δ、ε、γ和μ来命名,相对应组成的抗体就称为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。人IgG可进一步细分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4四个亚型。小鼠IgG可细分为IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3等亚类。IgG亚型抗体常被用于识别细胞表面的特定抗原,如CD3、CD4、CD8等T细胞标志物,以及CD19、CD20等B细胞标志物。
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