TUNEL In Situ Apoptosis Kit (HRP-DAB Method)
中文名称:TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒(HRP-DAB显色法)

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- 应用: 细胞凋亡-DNA片段化
检测原理 | 细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,剪断核小体间的基因组DNA,暴露的3’-OH可在末端脱氧核酸转移酶(TdT)的催化下加上生物素标记的dUTP,辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)可与之结合,在HRP的催化下通过DAB显色可观测到凋亡细胞,从而可通过普通光学显微镜检测到细胞的凋亡。由于正常的或正在增殖的细胞中几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被标记。这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 |
检测方法 | 比色法 |
样本类型 | 石蜡切片;冰冻切片 |
检测时间 | 3 hours |
检测仪器 | 普通光学显微镜 |
自备试剂 | 4%多聚甲醛(E-IR-R113),0.2% Triton X-100(E-IR-R122),3% H2O2(E-IR-R115),二甲苯,乙醇,DNase I,PBS(E-BC-R187),ddH2O,苏木素(E-IR-R120),中性树胶(E-IR-R118) |
保存温度 | 该产品可在-20°C避光条件下保存12个月。 |
有效期 | 12个月 |
运输条件 | 冰袋 |
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E-CK-A320 | One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Green, FITC) | 100 Assays , 50 Assays , 20 Assays |
Q1:请问做tunel染色需要烤片吗?不烤片的话不会脱片吗?
制作石蜡切片的过程需要烤片,但是切片制作完毕之后做tunel染色的过程不需要烤片。
Q2:请问下TUNEL显色法实验步骤,为什么要避光反应?
第1处是避免光照对TdT酶活的影响,此处用的湿盒就是避光的;第2处避光是:生物素分子很容易被光分解,生物素分子中的双键很容易接受光的激发,分解产生紫外光和活性自由基等物质,这些分解产物会破坏生物素和被标记分子之间的化学结合,进而影响实验结果的准确性和稳定性。
Q3:脱蜡干净的状态是什么样的呢?
组织透明,玻片不挂水即为脱蜡干净。
Q4:石蜡切片已经脱蜡通透了,能不能放到第二天再染色?
可以洗涤后浸泡在PBS中,放在4℃冰箱保存。
Q5:标记步骤中需要滴加多少体积的DAPI工作液呢?
DAPI染色时要求DAPI工作液覆盖样本即可。
Q6:有哪些原因会造成TUNEL假阳性呢?
具有高增殖或代谢活性细胞群,可能会存在DNA链的断裂,在这两种情况下,假阳性结果可能是样本本身带来的。当客户对结果的解释存疑时,细胞形态学的评价是一个重要的参数。
Q7:显色法TUNEL 细胞样本需要阻断吗?
需要的。3%H2O2阻断剂:许多组织细胞内存在过氧化物酶活性,从而导致辣根过氧化物酶标记免疫组化染色出现假阳性结果。为此,组织切片在染色前需采用阻断措施,以消除内源性过氧化物酶的活性。3%的过氧化氢可以与过氧化物酶反应,消除内源性过氧化物酶的活性,起到阻断的作用。
Q8:我用重金属溶液处理完福寿螺幼螺之后直接液氮速冻-80度保存了,那我保存的这个样品还可以用于tunel检测吗?
可以的,这个-80冻存的样本可以制作成冰冻切片,然后用冰冻切片做tunel检测即可。
Q9:我想问一下就是您家有个TUNEL产品能测红细胞凋亡吗?
TUNEL试剂盒是检测DNA的片段化,红细胞无细胞核,也无线粒体等细胞器,因此不能检测红细胞的凋亡。
Q10:您这边推荐的冰冻切片厚度是多少呢?
一般冰冻切片的厚度是在8-10 µm,太厚了可能会做不出来。如果切片较厚,通透时可根据实际情况适当延长蛋白酶K孵育时间。
