TUNEL In Situ Apoptosis Kit (HRP-DAB Method)
中文名称:TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒(HRP-DAB显色法)

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- 应用: 细胞凋亡-DNA片段化
检测原理 | 细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,剪断核小体间的基因组DNA,暴露的3’-OH可在末端脱氧核酸转移酶(TdT)的催化下加上生物素标记的dUTP,辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)可与之结合,在HRP的催化下通过DAB显色可观测到凋亡细胞,从而可通过普通光学显微镜检测到细胞的凋亡。由于正常的或正在增殖的细胞中几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被标记。这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 |
检测方法 | 比色法 |
样本类型 | 石蜡切片;冰冻切片 |
检测时间 | 3 hours |
检测仪器 | 普通光学显微镜 |
自备试剂 | 4%多聚甲醛(E-IR-R113),0.2% Triton X-100(E-IR-R122),3% H2O2(E-IR-R115),二甲苯,乙醇,DNase I,PBS(E-BC-R187),ddH2O,苏木素(E-IR-R120),中性树胶(E-IR-R118) |
保存温度 | 该产品可在-20°C避光条件下保存12个月。 |
有效期 | 12个月 |
运输条件 | 冰袋 |
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Q11:冰冻切片可以烘干吗?
冰冻切片千万不要烘干,切完放在-20或者-80保存,一周内使用-20保存可以,长期不用放在-80保存。实验前取出室温复温20分钟左右,在切片上滴加4%的多聚甲醛甲醛,室温固定30-60分钟后,再洗涤,按照说明书操作。
Q12:冰冻切片冰冻前进行过固定的,还需要做一步固定,在室温孵育30min吗?
如果已经固定过,则不需要再次孵育固定,可以直接进行后续实验步骤。
Q13:一步法TUNEL试剂盒可以检测精子样本吗?
可以用于检测精子样本。
Q14:TUNEL细胞爬片固定之后能过夜吗?
可以浸泡在PBS中于4℃过夜。
Q15:TUNEL可以用于观察黑腹果蝇组织中的细胞凋亡吗?
我司未进行过昆虫样本的TUNEL实验检测,如果客户需要用昆虫样本进行检测,可以查阅资料后进行预实验摸索实验方法。理论上是可以检测的,如果客户要做的话,可以自行摸索样本制备方法。
Q16:TUNEL原位和流式区别在哪里呢?
最主要的检测方式不同,一个用荧光显微镜检测,一个用流式细胞仪检测,其次检测样本也有所不同,原位主要检测的是石蜡切片,冰冻切片,细胞爬片或涂片。流式主要检测是细胞样本,包括悬浮细胞与贴壁细胞。
Q17:TUNEL凋亡试剂盒,可以不用爬片,用孔板来进行检测吗?
(1)不用爬片的话没法封片保存。
(2)不用爬片,用六孔板的话,试剂的用量会增加。
(3)由于孔较小,物镜的观察视野比较小。
Q18:PBS洗涤的建议用量是多少呢?
PBS洗涤时加入的PBS一定要完全覆盖住样本,并且保证在孵育过程中不干片。
Q19:DNase I Bufferr能不能用DEPC水稀释?
建议用超纯水稀释,不能用DEPC水稀释,DEPC水是用来保护RNA或者DNA不被酶解的,用它来稀释DNA酶,DNA酶就失效了,提取RNA的时候可以用这个DEPC水来溶解RNA。
Q20: TUNEL试剂盒能测mouse吗?
可以测mouse,TUNEL试剂盒不分种属。
