产品常见问题
为了提供更好的客户支持，解决客户关于细胞功能检测相关产品的疑问，我们整理并发布了关于细胞功能检测产品最常见问题的解答（FAQs），并将持续更新。
-
最主要的检测方式不同，一个用荧光显微镜检测，一个用流式细胞仪检测，其次检测样本也有所不同，原位主要检测的是石蜡切片，冰冻切片，细胞爬片或涂片。流式主要检测是细胞样本，包括悬浮细胞与贴壁细胞。答：E-CK-A211里面的缓冲液是10×的，需要稀释了以后再做实验，盒子保质期是一年。
E-CK-A211B里面的缓冲液是1×的，可以直接使用，不用稀释，因为是稀释液，所以盒子保质期是6个月。
不建议检测血液样本，血液中血小板及很多免疫细胞自身存在PS外翻的情况，会影响检测结果。Annexin V试剂盒可以用于贴壁细胞，但是需要注意以下几点：
1. 贴壁细胞诱导细胞凋亡时出现的漂浮细胞也是需要收集起来的，与后续收集的贴壁细胞一起检测。
2. 消化贴壁细胞要操作轻柔，避免人为操作带来的细胞损伤。
3. 胰酶消化的时间要适宜。尽量不使用含EDTA的胰酶，因为EDTA会影响Annexin V与PS的结合。如果一定要用含EDTA的胰酶，终止消化后要将细胞洗涤干净，尽量去除EDTA。如果流式细胞仪有DAPI通道，可以选择E-CK-A258 Annexin V-APC/DAPI Apoptosis Detection Kit；如果没有，则选择E-CK-A218 Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit。我司没有进行过植物样本的验证，如果您有需的话，可以做预实验看下效果。不建议使用Annexin V试剂盒直接检测冻存细胞，冻存操作可能会导致细胞凋亡坏死，得到不准确的实验结果。
答：最优用这个，干扰较小：Annexin V- Elab Fluor® Red 780/DAPI Apoptosis Kit E-CK-A280。
客户如果没有DAPI通道，那就用：Annexin V- Elab Fluor® Red 780/7-AAD Apoptosis Kit E-CK-A240。
Elab Fluor® Red 780检测通道同APC-CY7，如果客户没有DAPI通道也没有APC-CY7通道，那就只能用：Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Kit E-CK-A216，这个的干扰较大。答：Annexin V-APC/DAPI Apoptosis Kit E-CK-A258，这款可以满足细胞要求，但需确认流式细胞仪有405nm激光器。不可以，因为Annexin V与磷脂酰丝氨酸（PS）的结合依赖Ca2+，而常见的PBS溶液中不含Ca2+，而Binding Buffer 含有Ca2+，可以促进Annexin V与PS的结合。不加Binding Buffer，会导致Annexin V的结合能力降低，造成阳性信号大幅下降甚至无阳性信号。正常我们做Annexin V一般是做细胞系样本，圈门就只圈除碎片的以外的有效细胞，组织样本中由于细胞种类会多一些，具体看老师想检测整个组织样本的凋亡还是只检测其中某种细胞的凋亡，只检测某种细胞的凋亡有时还需要跟一些特异性的流式指标染色，先圈出细胞群再去看凋亡，有一些细胞群也能在FSC/SSC中直接圈出，不过群的位置也需要反圈门去确定。还有一点就是组织样本的处理也比较关键。处理不好可能会导致由于样本处理而导致的假阳性。固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败、和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能精准定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。同时，固定还可使细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。
