产品常见问题
为了提供更好的客户支持，解决客户关于细胞功能检测相关产品的疑问，我们整理并发布了关于细胞功能检测产品最常见问题的解答（FAQs），并将持续更新。
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PBS洗涤时加入的PBS一定要完全覆盖住样本，并且保证在孵育过程中不干片。建议室温孵育，25℃左右。Annexin V实验的染色过程实际上是使AnnexinV蛋白与细胞膜上的磷脂酰丝氨酸特异结合的过程，这个过程在细胞功能和酶活性正常的状态下进行为宜。根据试剂盒的规格以及使用方法可以确定具体能测多少样本。说明书中抗体的使用方法有两种，分别是一步法和两步法。一步法抗体使用量为5μL，两步法抗体使用量为2.5μL，我们这边是按照一步法（最大用量）来提供的，也就是说：如果您用两步法来做，规格为20 Assays的试剂盒，可以做40个样本，以此类推。确认下客户的仪器是否有DAPI通道，优先推荐Annexin V-APC/DAPI Apoptosis Kit，货号为E-CK-A258。不能，binding buffer里的钙离子浓度是经过实验摸索后确定的，含钙离子的PBS不一定会有binding buffer的作用和效果。不建议老师使用组织样本做Annexin V实验。一方面，组织样本制备成单细胞悬液的操作过程中，实验操作导致的凋亡可能比样本本身的凋亡率高，而且实验操作具有不稳定性，最终的实验无法判断出样本本身的实际凋亡率。另一方面，组织样本存在多种细胞类型，每种细胞的自发荧光不同，结果无法分析。FITC是490nm/530nm，7AAD是546nm⁄647nm（可以用488nm激发）。一般用FITC通道和PerCP通道就可以检测。上机之前，用未转染的有明显凋亡的细胞分别染7-AAD和APC，作为单阳对照1和单阳对照2；用转染绿色荧光的样本直接上机，作为单阳对照3。对照组细胞可通过以下两种方法诱导凋亡：①由于不同细胞受DMSO的影响程度不同，所以建议通过预实验摸索DMSO的作用时间或体积分数，可以先按以下体积分数（10%）摸索作用时间，每30min镜检一次。②未转染的细胞在50~60℃的水浴锅中水浴5~10min。当细胞形态变化或大量漂浮，可认为产生凋亡细胞群。因为在培养过程中，凋亡的细胞贴壁不牢，会大量漂浮在培养液中。为了结果的准确性，通常建议客户在检测凋亡时将悬浮的细胞与胰酶消化后的细胞都收集起来一起检测。我们没有验证过。因为单细胞硅藻有细胞壁，建议客户做预实验摸索一下染色时间和条件。PBS重悬细胞后逐滴加入-20°C预冷的无水乙醇，边加边震荡，使细胞分散成单细胞。固定时间要求不少于1h。
