产品常见问题
为了提供更好的客户支持,解决客户关于细胞功能检测相关产品的疑问,我们整理并发布了关于细胞功能检测产品最常见问题的解答(FAQs),并将持续更新。
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理论上是可行的,但是我们也没有验证过。JC-1的用量以及提取的线粒体的用量我们这边确定不了,可能需要摸索优化。在正常细胞和凋亡细胞中,都有JC-1的单体和聚合物存在。细胞逐渐凋亡的过程中,JC-1慢慢由聚合物解离变成单体,聚合物和单体的比例发生了变化。所以画门的时候普遍聚集在第三象限,画门区分正常细胞和凋亡细胞的时候需要在第三象限划分。一般CCK-8的吸光度值建议在1左右,最好是0.8~1.2。建议用透光的平底,且独立柱状相对最适合。可以。因为流式实验中单细胞比较敏感和脆弱,所以破膜要温和。客户如果没有saponin,可以在PBS中加1%BSA或者3~5%的FBS,然后再加入终浓度为0.2%的triton X-100,混匀后作为破膜试剂。加入BSA可以提高PBS的渗透压和离子浓度,使其更接近于细胞内液的环境,从而减少细胞受到剪切力的影响。此外,BSA还具有一定的缓冲性能,有助于维持PBS的稳定性,防止溶液的pH值发生变化,进一步保护细胞。皂素的通透是可逆的,一般用皂素通透的实验,后面的清洗都会继续加入皂素以维持细胞通透性。理论上是可以做,但是我们没有用过,建议您确定下这个仪器能不能扫描其吸收光谱(230 nm~800nm),记录A280及A655的数据(1 cm 光程)。150000是抗体的分子量,不同亚型抗体的分子量不同。1道尔顿=1g/mol , 摩尔消光系数 的单位为(L/mol•cm)。如果客户需要用这个公式来计算蛋白浓度的话,还需要知道自己蛋白的 一些固定参数。荧光共定位是利用荧光探针和共定位标记将蛋白质与目标位置连接在一起,我们的标记试剂盒可以让荧光素与蛋白质结合,以使蛋白质的位置可视化。结合的位点是蛋白的伯氨基进行标记,但能否做荧光共定位与蛋白本身有关,或需要通过相关预实验确定。标记试剂盒可以有效地对含有伯氨基(-NH2)分子进行蛋白标记,但是无法确定标记后蛋白的实验应用方向,建议客户做预实验验证实验的可行性。一步法操作更简单,两步法由于减小了孵育体系,所以染料用量减半,更节省试剂,从结果上来看,一步法与两步法的结果分辨率一致。