产品常见问题
为了提供更好的客户支持，解决客户关于细胞功能检测相关产品的疑问，我们整理并发布了关于细胞功能检测产品最常见问题的解答（FAQs），并将持续更新。
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absolute ethanol是无水乙醇，不建议用70%的，因为第三步需要保证乙醇的比例。
如果有的sub-G1峰话，是可以检测到的。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及 DNA 片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组 DNA 片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞在 PI 染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于 1，在流式检测的结果图上出现所谓的 sub-G1 峰，即凋亡细胞峰。周期检测是要用到无血清培养基的。实验开始前，需要用无血清培养基培养12h，使周期同步化（注意细胞状态，无血清培养时间不能太长；细胞状态太差的话，细胞可能就不增殖了，G2期会比较少，还可能会出现亚G1凋亡峰）。然后换用正常培养基开始药物处理、干预等实验，最后收样进行细胞周期的检测。流式细胞仪检测：125个样（1~5×10^5 个细胞）
荧光显微镜检测：100个样（96孔板）、50个样（24孔板）Calcein AM只有进入细胞内被细胞中内源性酯酶水解后才会有强荧光，未进入细胞的Calcein AM几乎没有荧光，所以上机前不需要洗。不建议把染料稀释后再分装，这样会导致Calcein AM水解，Calcein AM建议原液保存更稳定。Calcein AM原液可以根据需要进行分装，-80保存有效期更长，经常使用可以放在-20。使用buffer稀释后最好一天内用完，现配现用。细胞量最少需要100万个，蛋白浓度在1-4 mg/mL之间都可以。sf9细胞是昆虫细胞，如果caspase确实参与了昆虫细胞的凋亡途径的话，是可以用的。Caspase9试剂盒检测的是caspase9的酶活性，也就是被激活的caspase9，具有活性的caspase9是cleaved caspase9的二聚体或者四聚体。JC-1是需要同时检测FL1和FL2通道的变化来确定线粒体膜电位的变化的，与GFP存在荧光干扰，因此细胞带GFP的话是不能适用此款试剂盒的。JC-1 有单体和多聚体两种存在形式，两者发射光谱不同。在正常细胞内，线粒体膜电位较高，JC-1 聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可产生红色荧光；凋亡早期，线粒体膜电位降低，JC-1 不能聚集在线粒体基质中，此时 JC-1 为单体，可产生绿色荧光。因此，红色荧光和绿色荧光都是需要观察的。JC-1检测试剂盒不建议用于组织样本，因为组织样本在制备成细胞悬液的过程中，可能会由于机械操作导致细胞凋亡或损伤，这种情况下JC-1的结果可能不准确。另外，此试剂盒只能检测活的单细胞悬液，不能用于切片样本。MTT检测试剂盒广泛用于检测细胞增殖和细胞毒性，而MTS, XXT, WST-1, WST-8都是MTT的升级替代产品，和MTT相比有明显优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原成生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶剂来溶解。WST-8和XTT，MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT，MTS产生的formazan更易溶解。最后，WST-8比MTT，XTT更稳定，线性范围更宽，灵敏度更高。
